菠萝蛋白酶的提取、初步纯化及活性测定

为了吸引眼球先写个小插曲，实验室配制很多溶液都需要搅拌摇匀，为了节省人力自然就有搅拌机器，但是我以前只看到过那种一个托盘摇来摇去那种，这种梯度混合仪还真第一次见，而且还很好玩，原理大体是在溶液里放入白色的带磁性的长条颗粒，然后机子的磁极变换就会使得它旋转起来，自然就能搅拌了，这种比起以前的机器自然又是先进了。

上周五做的生化大实验是对菠萝提取蛋白酶，然后就简单纯化一下。

在之前我还专门查阅了很多文献，发现菠萝蛋白酶的提取以前的方法是用单宁（一种生物碱）来沉降，现在我们实验室做的方法是盐析法，然后用透析法来提纯，还有更先进的方法是超过滤。

但老师上课时告诉了我们，其实现在工业上生产还是用单宁来制备，十年前他去广西一带，带回来一桶菠萝蛋白酶（是糊状的,就是平时油漆桶大小），价钱是400块钱十公斤；而后来他从国外进口的菠萝蛋白酶（是干粉状的，纯度更高）则达到2000块钱1克，前后价格竟然相差5万倍，可想而知，提纯这东西是比较复杂难搞的，只要你的纯度提高那么一点，价格就是天翻地覆；但是现在我们国内一般还是生产这种糊状的，不禁让人有点尴尬啊。

这个实验我们用硫酸铵来盐析出蛋白，关于盐溶盐析就不解释了。

首先是削菠萝，其实提取菠萝的蛋白酶，只需要用到菠萝皮就足够了，菠萝肉当然是我们吃了哈哈。把菠萝皮放进榨汁机，榨汁时加入PBS溶液（磷酸盐缓冲液），然后用纱布过滤，这时就得下下面的这个菠萝汁啦。

然后拿去离心，这步是为了弃除一些没用的残渣。

然后加入30%饱和时需要的量的硫酸铵，导入离心管，放去冰箱4°C水浴两个小时，这是当然是去吃午饭啦，回来就可以继续做了。

水浴完就是又离心一次，这次得到的上下清液都要保留，上清液作为A液，下清液再加入PBS溶解作为B液，这两组要用做对蛋白酶的活性检测。

活性检测的原理是，菠萝蛋白酶可以将酪蛋白水解成酪氨酸，而酪氨酸的紫外吸光度与含量有关，所以我们可以用分光光度计来间接比较A、B液中哪个的蛋白酶活性更强。

测定出哪个的活性更高后，最后一步就是透析去盐。把溶液倒入透析袋，夹好夹子，透析自然是要定时地更换透析液的。透析完就可以放入冰箱保活。等待下次实验的需要。