种子萌发时蛋白质的转化

植物生理学的第一个实验是“种子萌发时蛋白质的转化”,这个实验必须先解释一下原理,不然昨晚还是不知道在做什么。

富含蛋白质的豆类种子在暗处萌发时,种子内贮藏的蛋白质迅速水解,产生各种氨基酸。这些氨基酸,一部分用作合成新蛋白质的原料,一部分通过脱氨作用转变为有机酸和游离氨。游离氨对活细胞有毒,在细胞内不能大量积累。植物体内可通过迅速形成酰胺的方式,将氨暂时贮存起来,并起到解毒的作用。因而,随着种子萌发天数的增加,作为氮代谢枢纽的天冬酰胺、谷酰胺便大量积累。本实验根据各种氨基酸与特定溶剂亲和力的不同,采用纸层析法观察黄豆种于萌发过程中蛋白质转化的情况。

书上说的原理就是这样,是不是很长篇累牍?其实就是说——

种子萌发后,蛋白质就会转化为氨基酸,氨基酸又迅速转化为各种酰胺。

我们要做的就是通过萌发前后的比较,证明这些蛋白质转化了。所以做的方法就是氨基酸的层析。

其实层析的原理很简单,就是因为不同的氨基酸的溶解度不同,在层析液里面溶解速度自然有快慢,就会在层析纸上留下先后的顺序

做的方法也很简单,就在层析纸的起点线上依次点样:黄豆粉提取液、子叶提取液、谷酰胺、天冬酰胺溶液,然后跑层析就可以了,层析的时间大约要一个小时。层析时的样子如下——

最后层析出来可看到,子叶提取液的氨基酸明显多一点,在这里我就不做什么解说了,实验报告都烦死我了。不过这次的黄豆粉提取液的点样不够好,原因是黄豆粉比较难溶,要是毛细管插得深一点又容易被粉末堵住,所以点样的浓度并不够,下次要适当提高溶解度。

◀ 菠萝蛋白酶的提取、初步纯化及活性测定液泡系和线粒体的活体染色 ▶